Cравнительная кинетическая характеристика тиаминкиназ из пивных дрожжей и головного мозга свиньи

Abstract

Методами ацетонового и аммонийного фракционирований, ионообменной хроматографии на ДЕАЕ-тойоперле 650М, гель-фильтрации на сефадексе G-100 и аффинной хроматографии на голубой сефарозе из мозга свиньи выделена электрофоретически гомогенная тиаминкиназа с суммарным выходом 15% и степенью очистки 2240 раз. По физико-химическим и кинетическим параметрам мембранно-ассоциированная тиаминкиназа из мозга существенно не отличается от одноимённого цитозольного белка из пивных дрожжей: имеет оптимум рН 8,6, молекулярную массу 52,8 ±1,2 кДа, металл-зависима и состоит из двух идентичных субъединиц. KS для свободных ионов магния и Km для тиамина и комплекса Mg · АТФ2- соответствует внутриклеточному содержанию их в мозге. Исходя из свойств тиаминовых ферментов, высказано предположение, что тиаминкиназа животных и микроорганизмов выполняет роль буферной системы, препятствующей немедленным изменениям концентраций активных форм витамина и обеспечивающей постоянство скорости сопряжённых реакций, использующих исходный общий кофактор –тиаминдифосфат.