ОСОБЕННОСТИ ФЛУОРЕСЦЕНЦИИ ТИАМИНКИНАЗЫ ГОЛОВНОГО МОЗГА СВИНЬИ, КОВАЛЕНТНО МЕЧЕНОЙ ПИРИДОКСАЛЬ-5'-ФОСФАТОМ

Abstract

С использованием флуоресцентной метки (пиридоксаль-5'-фосфата) исследованы свойства и параметры тиаминкиназы (КФ 2.7.6.2) головного мозга свиньи при её взаимодействии с субстратами (тиамин, АТР), кофактором (ионами магния) и эффектором (пируватом). Показано, что молекула фермента содержит два быстрореагирующих центра связывания метки по ε- или N-концевым α-аминогруппам лизиновых остатков с КS 0,9 ∙103 М-1. Модификация аминогрупп сопровождается выраженным увеличением скорости ферментативной реакции, причём характер изменения скорости свидетельствует о неоднозначности обоих участков. Активация тиаминкиназы меткой объясняется наличием в ней карбонильной группы и схожа по механизму с активацией пируватом. Пируват и субстрат фермента – тиамин, независимо от последовательности своего внесения, эффективно тушат флуоресценцию обоих типов хромофоров метки, указывая на функциональную взаимосвязь их центров сорбции, реализуемую посредством конформационных изменений белковой молекулы. Центры сорбции АТР и ионов металла пространственно удалены от метки.